默克限制性?xún)惹忻?/strong>是一種能夠識別雙鏈DNA分子中特定核苷酸序列，并在特定位置切割DNA鏈中的磷酸二酯鍵的一類(lèi)酶，簡(jiǎn)稱(chēng)限制酶。不同的限制性?xún)惹忻笗?huì )識別不同的DNA序列，它可以在識別序列內或距識別序列不遠的位置處切割DNA，酶切之后會(huì )形成不同類(lèi)型的產(chǎn)物。
默克限制性?xún)惹忻赋Ｓ糜诜肿涌寺?shí)驗中。但除了克隆，它還可以應用于疫苗研發(fā)生產(chǎn)、基因測序、SNP鑒定、ddPCR等領(lǐng)域。限制性?xún)惹忻傅拿饕歉鶕毦膶倜?、種名、菌株或血清型、發(fā)現的順序而定。
在使用商品化的限制性?xún)惹忻高M(jìn)行雙酶切時(shí)，一定要注意二者共用的Buffer，選錯了，試驗就會(huì )面臨失敗。膠回收時(shí)，一定要使用適用于膠回收的核酸染料。
每一個(gè)限制性?xún)惹忻妇褪且话咽中g(shù)刀，它們能夠識別特定的堿基序列準確切割。在使用這些酶切割后，會(huì )產(chǎn)生平末端和粘性末端。根據自己的需要做一些設計，一般來(lái)說(shuō)，我們使用粘性末端連接多些。
在分子克隆試驗中，我們常用II型的限制性?xún)惹忻?，比如BamHI、HindIII、EcoRI等等。利用它們做單酶切或雙酶切，構建重組質(zhì)粒。一般酶切為37℃，3－4小時(shí)。酶切時(shí)間過(guò)短會(huì )造成切開(kāi)的效率不高，過(guò)長(cháng)會(huì )造成非特異性切割。有些酶具有典型的星號活性，即在一定條件下出現亂切。
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